北京普析通用紫外可見分光光度計儀器操作

對TU-19系列儀器的所有操作幾乎都是與PC聯(lián)機(jī)后通過UVWin軟件進(jìn)行的。在 對儀器進(jìn)行操作前請通過UVWin軟件使用說明書，詳細(xì)了解UVWin的使用。本章只針 對雙光束測量的特點作相關(guān)說明，并以三個真實的分析過程為例介紹使用TU-19系列 儀器的一般過程。

關(guān)于雙光束測量

什么叫雙光束

雙光束紫外可見分光光度計在光路設(shè)計上采用兩束能量基本一致的光同時分別對 樣品和參比進(jìn)行測量（如下圖3-1所示，R和S分別為參比和樣品兩路光束），通過參 比光束實時反饋補(bǔ)償測量系統(tǒng)的穩(wěn)定性，提高儀器的穩(wěn)定性和測量精度。

在儀器結(jié)構(gòu)上，雙光束儀器與準(zhǔn)雙光束和單光束最大的不同在于，雙光束儀器的樣 品室有兩路光，可以同時在兩路光上放置參比和樣品

使用雙光束儀器

雙光束儀器在使用上和單光束（或準(zhǔn)雙光束）的差別在于：單光束儀器在校零和測 量時，分兩次將空白和樣品放入樣品池架中進(jìn)行測量；而雙光束儀器則是將空白和樣 品一次分別放入?yún)⒈群蜆悠穬陕烦丶苤?，然后進(jìn)行校零和測量操作。

在進(jìn)行暗電流校正時，雙光束儀器的黑擋塊只需要放置在樣品光路的樣品池架上 進(jìn)行操作即可。

您可以通過下一節(jié)的幾個實例來熟悉本機(jī)在實際測量中的操作。

實例應(yīng)用

本節(jié)列舉了 19最基本應(yīng)用的三個實例

光度測量實例

維生素B1可以促進(jìn)碳水化合物和脂肪的代謝，提供神經(jīng)組織所需要的能量，防止 神經(jīng)組織和退化。預(yù)防和治療腳氣病。而實際藥廠出產(chǎn)的維生素B1品質(zhì)檢測需要 在400nm下測定其吸光度值，當(dāng)其值不超過0.020時，為合格品。

應(yīng)用TU-19系列進(jìn)行維生素B1品質(zhì)檢測，需要使用UVWin軟件對待測樣品進(jìn)行 光度測量，具體操作步驟如下：

① 試劑配置

首先取1g維生素B1溶于10mL去離子水中作為樣品；然后，取兩個干凈配對的石 英比色皿,分別裝上去離子水作為參比溶液。

② 儀器開機(jī)

先打開與TU-19系列雙光束紫外可見分光光度計相連的計算機(jī)，進(jìn)入Windows操 作環(huán)境。確認(rèn)樣品室中無擋光物后，再打開光度計的電源開關(guān)，開啟UVWin操作軟件, 儀器進(jìn)入初始化過程。自檢無誤后，儀器進(jìn)主工作程序。開機(jī)預(yù)熱60mino

④暗電流校正

將隨機(jī)附帶黑擋塊放入樣品光路上的樣品池中，使用UVWin的暗電流校正功能進(jìn) 行儀器暗電流校正。暗電流校正完畢后取出黑擋塊。

提示：進(jìn)行暗電流校正可以消除儀器部分噪聲，保證樣品的測量結(jié)果更為準(zhǔn)確。您不需要在

每次測量時都進(jìn)行暗電流校正，一般在儀器環(huán)境發(fā)生變化時才必須進(jìn)行儀器的暗電流校正，所 謂的環(huán)境變化主要是指：環(huán)境溫度變化較大時、安裝位置改變、做高吸收度樣品時等。（建議您 在啟動儀器預(yù)熱后，在進(jìn)行測量前進(jìn)行暗電流校正，保證數(shù)據(jù)結(jié)果的準(zhǔn)確性）。

⑤校零

將裝有去離子水的兩個配對石英比色皿分別放入樣品光路樣品池和參比光路樣品 池中，然后合上樣品室蓋，按“校零"按鈕進(jìn)行校零操作，此時在軟件主界面上方顯示的 實時吸光度值應(yīng)該為0.000 Abs或非常近似的值。

⑥樣品測量

取出放置于樣品光路樣品池中的比色皿,倒掉去離子水，用維生素B1樣品溶液清 洗至少3遍后盛入樣品溶液。將盛有樣品溶液的比色皿放置于樣品光路的樣品池架上， 合上樣品室蓋，按“開始"按鈕進(jìn)行測量。等待一次測量完成后，再次按“開始"可以測 量下一個數(shù)據(jù)。通過對多組測量數(shù)據(jù)取平均可以得到樣品的測量結(jié)果。

⑦結(jié)果分析

對測量得到結(jié)果,您可以保存為UVWin專用的文件格式，方便日后打開查看，也可 以打印輸出。

光譜掃描實例

維生素B12在361 nm處有特征吸收峰，因此在測量維生素B12光譜時，測量者對 該波長下的吸光度值比較關(guān)注。下面就以維生素B12為例說明如何使用光譜測量。

采用TU-19系列雙光束紫外可見分光光度計對維生素B12進(jìn)行吸收峰的測量步驟 如下：

①試劑配置

取標(biāo)準(zhǔn)維生素B12注射液，按照B12與去離子水1:10的比例混合得到10mL稀釋 溶液。取兩個配對石英比色皿，都倒入去離子水（去離子水作為參比溶液）。

②儀器開機(jī)

先打開與TU-19系列雙光束紫外可見分光光度計相連的計算機(jī)，進(jìn)入Windows操 作環(huán)境。確認(rèn)樣品室中無擋光物后，再打開光度計的電源開關(guān)，開啟UVWin操作軟件, 儀器進(jìn)入初始化過程。自檢無誤后，儀器進(jìn)入主工作程序。開機(jī)預(yù)熱60min。